Практическое занятие по основам биохимии с методами клинико-биохимических презентация

Практическое занятие по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований «ХИМИЯ УГЛЕВОДОВ»

ОБНАРУЖЕНИЕ УГЛЕВОДОВ Качественные реакции на углеводы позволяют определить их присутствие в различных биологических жидкостях и провести дифференциацию моно-, ди- и полисахаридов. В клинической лабораторной практике этими реакциями пользуются для обнаружения в моче лактозы, мальтозы и пентоз, что имеет диагностическое значение.

Реакция №1 «Проба Биаля (обнаружение пентоз)» Принцип: пентозы с орцином и треххлористым железом в кислой среде образуют при нагревании соединение желто-зеленого цвета.

Реактивы : Реактивы : 1) орцин (5-метилорцин); 2) концентрированная хлористоводородная кислота; 3) треххлористое железо FeCI3 x 6H2O, 10% раствор; 4) реактив Биаля (1 г орцина растворяют в 500 мл хлористоводородной кислоты и добавляют 1 мл 10% раствора треххлористого железа); 5) моча;

Берут пробирку, подписывают и наливают 5 мл реактива Биаля

Добавляют 1 мл мочи

Пробирку нагревают до кипения

При положительной реакции появляется желто-зеленое окрашивание. В моче здорового человека пентозы не обнаруживаются (отрицательный результат)

Реакция №2 «Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)» Принцип: лактоза и мальтоза с аммиаком в щелочной среде образуют при нагревании окрашенные соединения.

Реактивы : Реактивы : 1) аммиак водный, концентрированный; 2) гидроокись калия, 20% раствор; 3) 1% раствор лактозы; 4) 1% раствор мальтозы; 5) моча.

Берут три пробирки и номеруют

В 1-ю пробирку добавляют 5 мл мочи

Во 2-ю пробирку добавляют 5 мл раствора лактозы (1% раствор)

В 3-ю пробирку добавляют 5 мл раствора мальтозы (1% раствор)

Во все три пробирки прибавляют 2,5 мл раствора аммиака

Затем во все 3 пробирки добавляем 200 мкл (0,2 мл) раствора КОН (20% раствор)

Пробирки нагревают на водяной бани 30 минут при 600С

При наличие лактозы появляется коричневая окраска (пробирка №2)

При наличие мальтозы появляется красная окраска (пробирка №3)

В моче здорового человека мальтоза и лактоза не обнаруживается (пробирка №1)

Реакция №3 «Проба Селиванова (обнаружение фруктозы» Принцип: при нагревании фруктозы с резорцином в кислой среде образуются соединения, окрашенные в красный цвет.

Реактивы : Реактивы : 1) HCl, 1 моль/л; 2) резорцин (5 г в 1 моль/л раствора HCl); 3) моча; 4) 1% раствор фруктозы.

Берут 2 пробирки, номеруют

В 1-ю пробирку вносят 2 мл мочи

Во 2-ю пробирку вносят 2 мл раствора фруктозы (1% раствор)

После чего в каждую пробирку приливают по 1 мл раствора резорцина

Пробирки нагревают до закипания

При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание (пробирка №2)

В норме окраска не появляется (пробирка №1)

Оценку пробы проводят в момент закипания, так как при длительном кипячении окраска может появиться при наличии глюкозы (при небольшой концентрации глюкозы образуется красно-бурый осадок). Пищевая нагрузка медом и фруктами может дать положительную пробу.

Реакция №4 «Обнаружение крахмала» Принцип: крахмал с йодом образует окрашенное соединение синего цвета.

Реактивы : Реактивы : 1) 1% раствор крахмала; 2) йод, 1% раствор в 2% растворе йодида калия.

Берут пробирку и подписывают её

Добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)

Затем добавляют 1-2 капли раствора йода

При положительной реакции на йод появляется ярко-синее окрашивание

СВОЙСТВА УГЛЕВОДОВ

Реакция №5 «Реакция Троммера» Принцип: глюкоза в щелочной среде восстанавливает окись меди в закись, при этом сама окисляется до глюконовой кислоты.

Реактивы : Реактивы : 1) глюкоза, 1% раствор; 2) мальтоза, 1% раствор; 3) сахароза, 1% раствор; 4) крахмал, 1% раствор; 5) гидроокись натрия, 10% раствор; 6) сульфат меди, 5% раствор.

Берут 4 пробирки и номеруют

В 1-ю пробирку добавляют 10 капель раствора глюкозы (1% раствор)

Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель раствора мальтозы (1% раствор)

В 3ю пробирку добавляют 10 капель раствора сахарозы (1% раствор)

В 4-ю пробирку добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)

После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель гидроокиси натрия (NaOH 10% раствор)

Затем в каждую пробирку добавляют по 2 капли сульфата меди (CuSO4 5% раствор)

Каждую пробирку осторожно нагревают до кипения

В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба положительная выпадает осадок кирпично-красного цвета (закись меди)

В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная (изменения цвета не происходит)

Реакция №6 «Реакция Ниландера» Принцип: Глюкоза, окисляясь, восстанавливает висмут до гидрата закиси или свободного состояния.

Реактивы : Реактивы : 1) глюкоза, 1% раствор; 2) мальтоза, 1% раствор; 3) сахароза, 1% раствор; 4) крахмал, 1% раствор; 5) реактив Ниландера (в фарфоровой ступке смешивают 2 г нитрата висмута и 4 г сигнетовой соли. При тщательном растирании добавляют небольшими пропорциями 10 мл 10% раствора гидроокиси натрия. Фильтруют, хранят в склянке тёмного стекла на холоде).

Берут 4 пробирки и номеруют

В 1-ю пробирку добавляют 10 капель раствора глюкозы (1% раствор)

Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель раствора мальтозы (1% раствор)

В 3ю пробирку добавляют 10 капель раствора сахарозы (1% раствор)

В 4-ю пробирку добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)

После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель реактива Ниландера

Каждую пробирку осторожно кипятят 2 минуты

В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба положительная появляется темно-коричневое окрашивание

В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная (изменения цвета не происходит)

Надеемся, что наша инструкция поможет вам не сделать ошибок в практической работе. Желаем удачи!

Составитель: Кузнецова Т.Н. – преподаватель дисциплины «Основы биохимии с методами клинико-биохимических исследований» Москва 2008 год