Генетика бактерий. Организация генома прокариот презентация

ГЕНЕТИКА БАКТЕРИЙ Организация генома прокариот

ДНК – носитель наследственной информации

Двойная спираль ДНК Макромолекула ДНК представляет собой две антипараллельные неразветвленные полинуклеотидные цепи, правозакрученные вокруг общей оси в двойную спираль. Такая пространственная структура удерживается множеством водородных связей, образуемых азотистыми основаниями, направленными внутрь спирали.  

Генетический код – способ записи информации о структуре белка, тРНК, рРНК Свойства кода: Триплетность Универсальность Вырожденность (синонимичность)‏ Неперекрываемость Фиксированная стартовая точка: началом трансляции любого гена является кодон AUG, в конце UAA,UAG, UGA- стоп-кодоны Если генетический код считывается неперекрывающимися триплетами, есть только три возможности транслирования нуклеотидной последовательности в аминокислотную в зависимости от стартовой точки Эти три возможности называют рамками считывания Соответственно участок двойной спирали ДНК содержит 6 рамок считывания

Размеры геномов

Геномы прокариот включают 2 типа генетических структур: Геномы прокариот включают 2 типа генетических структур: - нуклеоид - внехромосомные элементы-плазмиды В состав хромосомы входят: Структурные гены, кодирующие белки и РНК Межгенные участки (спейсеры) Регуляторные элементы Мобильные элементы

Большую часть генома прокариот (80-90%) составляют кодирующие области Большую часть генома прокариот (80-90%) составляют кодирующие области Интроны встречаются в генах, кодирующих РНК и белки, но значительно реже, чем у эукариот

Геномы прокариот – динамичные структуры даже в пределах вида Геномы прокариот – динамичные структуры даже в пределах вида Исходя из внутривидовой вариабельности геномов, выделяют: - Кор-геном (базовый, core) – включает гены «домашнего хозяйства», ответственные за системы репликации, транскрипции, трансляции, ключевые пути метаболизма и формирования клеточных структур, определяющих видовую/родовую принадлежность - Вспомогательные гены – контролируют процессы и признаки, обеспечивающие приспособленность к определенной экологической нише; многие из таких генов локализованы в плазмидах и мобильных элементах, которые не обязательно присутствуют во всех штаммах одного вида

Пан-геном - все имеющиеся в пределах вида/рода гены (набор всех генов, присутствовавших хотя бы в одном штамме кишечной палочки) Пан-геном - все имеющиеся в пределах вида/рода гены (набор всех генов, присутствовавших хотя бы в одном штамме кишечной палочки)

Бактериальная хромосома – это двуспиральная правозакрученная ДНК, замкнутая в кольцо – нуклеоид Бактериальная хромосома – это двуспиральная правозакрученная ДНК, замкнутая в кольцо – нуклеоид Нуклеоид располагается в цитоплазме С нуклеоидом ассоциированы молекулы РНК-полимеразы, ДНК-топоизомеразы и гистоноподобного белка ДНК нуклеоида находится в состоянии отрицательной сверхскрученности. Супервитки можно рассматривать как форму запасания энергии, которая может использоваться для разделения цепей ДНК при инициации транскрипции. Суперспирализация необходима для упаковки громадной молекулы ДНК в малом объеме клетки Помимо этого, суперспирализация ДНК, облегчающая ее расплетение, обеспечивает начало репликации и транскрипции

Некоторые бактерии имеют линейные молекулы ДНК, но их структура отличается от эукариотических, имеющих специальные концевые последовательности – теломеры Некоторые бактерии имеют линейные молекулы ДНК, но их структура отличается от эукариотических, имеющих специальные концевые последовательности – теломеры Так, у стрептомицетов к  5‘-концам ковалентно присоединены белки, обеспечивающие свободный 3‘-конец для инициации репликации. Другой тип линейных хромосом, имеющих ковалентно замкнутые «шпилечные» концы, обнаружен у спирохет рода Borreliа Фитопатогенная бактерия имеет одну кольцевую и одну линейную хромосомы

ДНК В структуре ДНК можно выделить следующие участки Ген - участок молекулы ДНК, отвечающий за синтез одного конечного продукта (белка или функциональной РНК) Оперон - участок молекулы ДНК, считывающийся в составе одной молекулы мРНК и кодирующий синтез нескольких функционально связанных конечных продуктов Мобильные элементы: IS- последовательности Транспозоны

Регуляторные элементы генома прокариот Индивидуально экспрессируемый прокариотический ген помимо кодирующей структуру белка или РНК области содержит промотор и терминатор транскрипции Функционально родственные гены часто располагаются один за другим, транскрибируются в составе одной полицистронной мРНК и регулируются координированно. Объединение в оперон облегчает горизонтальный перенос целого кластера генов

Строение лактозного оперона Оперон - набор функционально связанных генов, транскрибирующихся в составе одной молекулы мРНК

Регуляция транскрипции Работа лактозного оперона регулируется двумя системами: белком-репрессором – индивидуальный сигнал на наличие лактозы белком, активирующим катаболизм (САР), действующим опосредованно, через глобальный сигнал цАМФ- сенсор наличия глюкозы

Плазмиды, вирусы и мобильные элементы Помимо хромосомных генов, кодирующих белки и РНК, в состав геномов прокариот входят другие генетические структуры: Мобильные элементы Плазмиды Интегроны Профаги CRISP локусы Различные регуляторные элементы

МОБИЛЬНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ

Это участки ДНК, способные как целое перемещаться из одного участка репликона в другой, а также между репликонами Это участки ДНК, способные как целое перемещаться из одного участка репликона в другой, а также между репликонами ~1000 н.п. Содержат только гены транспозиции (их собственного перемещения): Ген транспозазы (фермента, обеспечивающего процесс исключения IS-элемента из ДНК и его интеграцию в новый локус) Ген, детерминирующий синтез репрессора (регулирует весь процесс перемещения) Инвертированные повторы

Что такое повтор? - участок ДНК, который встречается более одного раза в геномной последовательности. Наиболее частые: Транспозоны Дуплицированные гены (паралоги) VNTR – локус с варьирующим числом тандемных повторов; послерасщепления таких аллелей рестриктазами образуются рестрикционныефрагменты различной длины, которые могут быть  использованы в качестве маркеров при картировании генов Короткие палиндромные повторы, регулярно расположенные группами (CRISPR — Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) — это прямые и разделяющие их уникальные последовательности в ДНК бактерий и архей, которые совместно с ассоциированными генами (Cas, CRISPR-associated genes) обеспечивают защиту клетки от чужеродных генетических элементов (бактериофагов, плзмид).

В сравнительной геномике для выяснения родственных связей и происхождения таксонов принято использовать понятие ортологичных и паралогичных генов В сравнительной геномике для выяснения родственных связей и происхождения таксонов принято использовать понятие ортологичных и паралогичных генов

Репликативная (незаконная) рекомбинация – перемещение IS-элементов

Значение IS элементов 1. Участвуют в мутационной изменчивости микроорганизмов – инсерциях и делециях. Инсерция IS элементов в бактериальную ДНК приводит к синтезу неполноценного белка.   2. Являются генетическими маркерами вида или рода бактерий. Некоторые IS последовательности специфичны для определенных видов микроорганизмов, что позволяет их использовать для видовой идентификации бактерий.  3. Являются местом распознавания и встраивания плазмид и генно-инженерных векторов. Плазмиды и генно-инженерными векторы встраиваться в бактериальную хромосому в области IS последовательностей.  4. Участвуют в регуляции функций генов – активации или репрессии.

Транспозоны (Tn-элементы) состоят из 2000-25 000 пар нуклеотидов содержат фрагмент ДНК, несущий специфические гены, и два концевых IS-элемента На обоих концах Tn находятся прямые или инвертированные повторы, по которым транспозаза распознает их и вырезает.

Транспозоны (Tn-элементы) Перенос транспозонов осуществляется консервативным или репликативным механизмом. Консервативный перенос происходит путем вырезания транспозона из одного участка и транспозицией в другой без увеличения количества копий, при этом участок ДНК, откуда вырезается транспозон, утрачивает свои функции. При репликативном способе переноса синтезированная копия транспозона перемещается в новое место, при этом механизме увеличивается количество копий. 

Консервативная транспозиция

Транспозоны (Tn-элементы). Функции Транспозоны участвуют в регуляции активности генов, инактивируя их или активируя. Осуществляют горизонтальный перенос генов, например, вирулентности или резистентности, обуславливая распространение устойчивости к антибиотикам среди микроорганизмов. Перемещение подвижных генетических элементов по репликону или между репликонами вызывает: •  инактивацию генов тех участков ДНК, куда они, переместившись, встраиваются; •  образование повреждений генетического материала; •  слияние репликонов, т.е. встраивание плазмиды в хромосому; •  распространение генов в популяции бактерий, что может приводить к изменению биологических свойств популяции, смене возбудителей инфекционных заболеваний, а также способствует эволюционным процессам среди микробов.

Интегроны - генетические элементы, имеющие в своем составе интеграционный модуль с геном интегразы, сайтом интеграции и промотором, направленным в противоположную от гена интегразы сторону - благодаря этому модулю интегроны способны встраиваться в геном и экспрессировать чужие гены в составе кассеты

Интегроны Кассета может существовать в двух формах: линейной, когда кассета интегрирована в интегрон, и в виде маленькой кольцевой двухцепочечной ДНК. Кассеты имеют размеры от 260 до 1500 н.п. Они содержат преимущественно 1 ген антибиотикорезистентности и сайт рекомбинации, состоящий из 59 пар оснований, расположенный на З'-конце. Интеграза осуществляет рекомбинацию между участком 59 н.п. кассеты и участком att интегрона, включая гены кассеты в интегрон в такой ориентации, чтобы они могли экспрессироваться с промотора Р интегрона. Интеграция кассет в интегрон является обратимым процессом. Интегроны могут располагаться как на хромосоме, так и на плазмидах. Один интегрон может захватывать несколько кассет антибиотикорезистентности.

CRISPR- Сas Название локуса CRISPR — фактически его словесный портрет: «скопление разделенных регулярными промежутками коротких симметричных повторов» (clustered regularly interspaced short palindromic repeats). одинаковые короткие повторы чередуются с неповторяющимися последовательностями, как в детском стишке Даниила Хармса: «Чиж-судомойка, чиж-поломойка, чиж-огородник, чиж-водовоз...» — только вместо «чижа» палиндром, одинаково читающийся с обоих концов. СRISPR-структуры чаще располагаются на основной хромосоме (нуклеоиде), но иногда входят в состав плазмид  CRISPR — это сложная многокомпонентная система, состоящая из кассет, содержащих повторы и спейсеры

CRISPR- Сas Между идентичными повторами располагаются отличающиеся друг от друга фрагменты ДНК — спейсеры, многие из которых соответствуют участкам геномов вирусов, паразитирующих на данной бактерии. CRISPR — это база данных бактерии о контактах с вирусами, подобная тому, как лимфоциты человека хранят информацию о контактах с инфекционными агентами, если бактерии удавалось победить вирус, она как бы подбирала фрагменты его ДНК и встраивала в свой геном, формируя своего рода картотеку вирусов, с которыми она сталкивалась прежде

CRISPR- Сas Итак, к локусу CRISPR примыкает лидерная последовательность , а также CRISPR-ассоциированные гены (CAS), кодирующие белки семейства Cas. Лидерная последовательность играет роль промотора — стартовой площадки, с которой начинается транскрипция массива CRISPR, то есть «переписывание» последовательности на РНК (не кодирует белки) Длинная молекула РНК, которая образуется после транскрипции CRISPR, разрезается на фрагменты. .

CRISPR- Сas В процессе нарезки участвует небольшая РНК, комплементарная повторам, — tracrРНК: она служит «наводчицей» для белка Cas9, к которому подсоединяется фермент РНКаза III, нарезающий длинную молекулу РНК. Исполнив свою роль, РНКаза III уходит.

CRISPR- Сas Так образуются комплексы crРНК/tracrРНК-Cas9—оружие иммунной системы прокариот. А затем начинают расправу с врагом: спейсерные участки crРНК находят комплементарные им участки вражеских нуклеиновых кислот и приносят к ним активированные Cas-белки, те вызывают их расщепление и последующую деградацию. Таким образом, crРНК выполняет роль проводника, направляющего нуклеазу к цели, за что она и получила свое другое название: «РНК-гид» 

CRISPR- Сas

CRISPR- Сas Таким образом, атакуются только те участки вражеской ДНК, рядом с которыми находятся эти короткие последовательности. У разных видов бактерий РАМ различаются. Если участок ДНК комплементарен crРНК, но рядом с ним нет РАМ, то комплекс crРНК/tracrРНК-Cas9 его не распознает. У этой особенности есть биологическое объяснение, пока экспериментально не подтвержденное. Дело в том, что в локусе CRISPR наряду со спейсерами, комплементарными инородной ДНК, встречаются и спейсеры, нацеленные на собственную ДНК бактерии. И таких спейсеров-«самоубийц» немало — порядка 20%. Гены эти, однако, не разрушаются, возможно, из-за отсутствия рядом с ними PAM

CRISPR- Сas. Практическое использование Маркировка и типирование штаммов. Жизнь каждого бактериального штамма неповторима и уникальна, как и череда перенесенных им инфекций, записанная языком спейсеров. Индивидуальный рисунок CRISPR-кассеты служит естественной генетической маркировкой запатентованных коммерческих штаммов. Типирование штаммов на основании множества спейсеров CRISPR-кассет давно применяется для определения эпидемиологической разновидности разных видов болезнетворных бактерий. Прививки для бактерий. Бактериофаги представляют серьезную угрозу для культур промышленных бактерий. CRISPR — это отличная настраиваемая платформа. На ее основе можно собрать нужный профиль устойчивости только за счет добавления спейсеров к соответствующим бактериофагам. Благодаря CRISPR-системам можно увеличивать продолжительность жизни ценных штаммов. Прививки от бактерий, фаготерапия. Существенная часть бактерий, населяющих тело человека, в том числе, болезнетворных, содержит CRISPR-системы. Находясь в условиях непрекращающейся гонки вооружений с бактериями, фаги научились красть их оружие, CRISPR-системы, и использовать для избегания клеточного иммунитета. В ближайшем будущем с помощью CRISPR можно будет сконструировать суперфаги, очень специфичные и высоко эффективные против тяжелых бактериальных инфекций человека. Генетические ножницы на основе CRISPR. Последовательности-мишени специфически узнаются с помощью crРНК в составе эффекторного комплекса. Эти crРНК можно модифицировать, а значит менять мишень для эффекторного комплекса. Таким образом, CRISPR-системы можно легко перепрограммировать и использовать как удобный инструмент направленной манипуляции с геномами: для встраивания, удаления и модификации структурных генов и регуляторных последовательностей. Хотя CRISPR-система — это исключительно прокариотическая придумка, она может быть успешно перенесена в клетки человека и многих других эукариот без потери функциональности и без негативного эффекта для реципиента

Отличительные особенности организации генома прокариот Относительно высокое (70%) содержание структурных генов на имеющуюся ДНК . Высокое абсолютное число генов. Организация генов в опероны – целостно транскрибируемые группы функционально родственных генов. Отсутствует интрон- экзоннная структура – гены непрерывны. Присутствие внехромосомной ДНК – плазмид Репликация, транскрипция и трансляция происходят в цитоплазме Процесс транскрипции и трансляции проходит одновременно Полицистронные мРНК

Плазмиды – кольцевые двунитевые ДНК,способные к автономной репликации Плазмиды – независимые репликоны, т.е. способны самостоятельно инициировать собственную репликацию Для репликации используют синтетический аппарат клетки, ее пластические и энергетические ресурсы Все плазмиды контролируют собственную репликацию и следовательно число копий в клетке. Плазмиды с одним и тем же типом контроля репликации несовместимы. В клетке бактерии могут находиться в цитоплазме или быть интегрированными в бактериальную хромосому Плазмиды существенно различаются в отношении круга хозяев: узкоспецифичные и широкоспецифичные

Плазмиды Плазмиды состоят из модулей: обязательный модуль основного репликона, и, помимо него, модули распределения, переноса и различных биохимических свойств

Плазмиды. Классификация По способности инициировать процесс конъюгации Конъюгативные (трансмиссивные)  Имеют более крупные размеры; содержат область tra-генов (tra - от TRAnsfer genes), то есть генов, белковые продукты которых обеспечивают конъюгацию. Продукты tra-генов вызывают формирование пили, образуют комплекс ферментов, изменяющих ДНК нужным образом во время переноса, а также противодействуют прикреплению пилей других бактерий к клеточной стенке данной. Неконъюгативные (нетрансмиссивные)  Не содержат области tra-генов, а потому не способны к самостоятельной передаче генетического материала в другие бактериальные клетки. Мобилизуемые  Некоторые исследователи выделяют также класс мобилизуемых плазмид, которые содержат только часть tra-генов. Они также способны передавать свой ДНК-материал в ходе конъюгации, используя белковые продукты трансмиссивных плазмид, находящихся в той же клетке.

Плазмиды. Классификация По обычному числу копий плазмиды данного типа в клетках: Высококопийные Низкокопийные По группам несовместимости Совместимость — это способность двух или нескольких плазмид стабильно сосуществовать в одной клетке. Родственные плазмиды ( с одним типом контроля репликации) обычно не совместимы друг с другом, и вместе образуют одну группу несовместимости

Плазмиды. Классификация По функции: Половые F-плазмиды (от англ. Fertility — способность к размножению). Содержат tra-гены, способны инициировать половой процесс у бактерий — конъюгацию. Плазмиды лекарственной устойчивости — R-плазмиды (от англ. Resistance — устойчивость). Кодируют белковые продукты, обеспечивающие устойчивость бактерий к антибиотикам и др. Col-плазмиды — содержат гены колицинов (бактериоцинов — белков, подавляющих жизнедеятельность близкородственных бактерий других разновидностей). Средство борьбы за существование.  Плазмиды биодеградации — плазмиды, продукты которых позволяют утилизировать необычный пищевой или энергетический субстрат (например, салициловую кислоту). Плазмиды патогенности кодируют факторы патогенности бактерий. Например, Ent-плазмида – синтез энтеротоксина; Hly-плазмида – синтез гемолизина

Профаги - вирусные геномы, встроенные в состав генома клетки-хозяина и реплицирующиеся в его составе некоторые бактериофаги (P1, N15) в лизогенном состоянии не включаются в хромосому хозяина, а представляют собой плазмиды Интегрированные профаги могут накапливать мутации и терять способность к литическому развитию; такие «дефектные» фаги имеются в геномах большинства прокариот Часто профаги и другие мобильные элементы входят в состав «геномных островов», привносимых в геном в результате горизонтального переноса генов

Геномные острова Геномные острова (genomic islands, ГО) — сегменты ДНК, присутствующие в геноме одних штаммов и отсутствующие у других, даже близкородственных штаммов одного вида. Отличные от ДНК-мишени нуклеотидные характеристики: G+C состав, частоты тетрануклеотидов и использование кодонов;  Несут ген тирозиновой рекомбиназы (интегразы), обеспечивающей встраивание ГО в специфические районы хромосомы — гены тРНК Часто фланкированы 16—20-п.н. повторами ДНК-мишени, которые могут использоваться для вырезания острова. Часто содержат IS-элементы и транспозоны, участвующие в приобретении или устранении генетической информации в пределах острова Играют важную роль в эволюции и адаптации бактерий к изменяющимся условиям среды обитания, кодируя факторы патогенности, симбиотического «стиля жизни», резистентности к тяжёлым металлам и антибиотикам, ферменты деградации ксенобиотиков и т.п.

Фенотипическая/Модификационная изменчивость Морфологическая модификация выражается в изменениях формы и величины бактерий. Например, при добавлении пенициллина к питательной среде клетки некоторых бактерий удлиняются. При длительном росте бактерий в одной и той же среде возникает полиморфизм, обусловленный влиянием накопившихся в ней продуктов их жизнедеятельности. Культуральная модификация состоит в изменении культуральных свойств бактерий при изменении состава питательной среды. Например, при недостатке кислорода у стафилококка утрачивается способность образовывать пигмент.  Биохимическая (ферментативная) модификация. Например, при посеве на питательную среду с лактозой и без глюкозы бактерии Escherichia coli начинают синтезировать ферменты, расщепляющие лактозу. Модификация - это способ приспособления микроорганизма к условиям внешней среды

В процессе изучения изменчивости микроорганизмов была обнаружена особая форма модификационной изменчивости - диссоциация. В процессе изучения изменчивости микроорганизмов была обнаружена особая форма модификационной изменчивости - диссоциация. Этот вид изменчивости выражается в том, что при посеве некоторых культур на плотные питательные среды происходит разделение колоний на два типа: гладкие, круглые, блестящие колонии с ровными краями - S-форма (от англ. smooth - гладкий), и плоские, непрозрачные колонии неправильной формы, с неровными краями - R-форма (от англ. rough - шероховатый). Существуют также переходные формы: М-формы (слизистые) и g-формы (карликовые). Колонии, относящиеся к гладкой S-форме, могут при определенных условиях переходить в R-форму и обратно, однако переход R-формы в S-форму происходит труднее. Диссоциация сопровождается изменениями биохимических, морфологических, антигенных и вирулентных свойств возбудителей. Диссоциация наблюдается у ряда бактерий, в частности у возбудителей сибирской язвы, чумы и др.

МУТАЦИИ

МУТАЦИИ Мутации, затрагивающие множество пар нуклеотидов, называют хромосомными: Дупликации – возникновение в данной нуклеотидной последовательности одного или, чаще, нескольких повторов. Делеции – утрата двух или нескольких пар оснований. Инверсии – изменение порядка нуклеотидов в ДНК на обратный по отношению к ориентации в штаммах дикого типа, возникающее обычно в результате рекомбинации с переворотом (flip-flop). Транслокации – перенос фрагмента ДНК в новое положение.

МУТАЦИИ Мутации, приводящие к утрате или изменению какой-то функции клетки – прямые мутации. Например, бактерии E. coli, способные в норме сбраживать лактозу (Lac+-фенотип), могут утрачивать данный признак, и поэтому мутация Lac+ Lac–, будет считаться прямой. В результате обратной мутации у мутантного организма восстанавливается исходный (или дикий) фенотип. Обратные мутации бывают истинными (истинные реверсии) и вторичными. При истинных обратных мутациях в результате второй мутации восстанавливается исходный генотип. Если эффект первой мутации компенсирован мутацией в другой части этого же или расположенного рядом гена - вторичные реверсии. Если мутации возникают в других участках генома и за счет различных механизмов обеспечивают обходные пути для снятия эффекта первой мутации - супрессорные мутации. 

МУТАЦИИ Мутации носят случайный, ненаправленный характер (за исключением целенаправленного эксперимента) Например, при посеве бактерий на питательную среду смогут вырасти колонии тех бактерий, который случайным образом приобрели «подходящую» мутацию

МУТАГЕНЫ Азотистая кислота (HNO2) дезаминирует (отщепляет аминогруппу и замещает другой группой) аденин, гуанин или цитозин, что приводит к ошибкам при репликации ДНК. Происходит простая замена оснований, или транзиция. Гидроксиламин (NH2OH) вступает в реакцию главным образом с цитозином и изменяет его так, что он при репликации ДНК предпочтительно спаривается с аденином вместо гуанина (транзиция). Переход в другую таутомерную форму может привести к неправильному образованию пар во время репликации ДНК. Часто для выделения мутантов используют 5-бромурацил и 2-аминопурин. 5-Бромурацил представляет собой соединение, сходное по строению с тимином и может включаться вместо тимина в цепь ДНК как комплементарное аденину основание. При переходе в енольную форму 5-бромурацил (БУ*) ведет себя при репликации ДНК как цитозин и спаривается с гуанином. После третьего цикла репликации вместо пары А–Т в молекуле ДНК обнаруживается пара Г–Ц.

МУТАГЕНЫ Молекулы акридиновых красителей внедряются между соседними азотистыми основаниями в цепи ДНК и увеличивают расстояние между ними. Такое пространственное изменение при репликации ДНК может вызывать ошибки двух типов – утрату нуклеотида или включение дополнительной пары нуклеотидов. УФ-лучи действуют на тиминовые основания, следствием чего является образование димеров тимина в ДНК (Наиболее уязвимы участки ДНК с двумя соседними тиминами). Такие димеры служат источником возникновения ошибок при репликации ДНК. УФ-лучи вызывают мутации типа транзиций, трансверсий или делеций. Ионизирующее излучение может изменять структуру азотистых оснований и вносить разрывы в цепи ДНК

Тест Эймса Тест-штаммы бактерии Salmonella, ауксотрофные по гистидину, растут на агаровой среде, содержащей гистидин, и не растут на среде с глюкозой; способность к росту на среде с глюкозой возникает только у ревертантных бактерий, способных синтезировать гистидин. Оценку мутагенного действия определенного химического соединения проводят по числу ревертантов, возникающих в присутствии этого соединения. С помощью Э.т. проверяют на канцерогенность многие вещества: промышленные химикаты, лекарственные препараты, консерванты, пестициды, косметические средства и т. д. 

http://elementy.ru/nauchno-populyarnaya_biblioteka/432418/Umnye_nozhnitsy_dlya_DNK http://biomolecula.ru/content/1498 https://postnauka.ru/faq/59807 http://biomolecula.ru/content/1488http://biomolecula.ru/content/1488