Применение эксклюзионной хроматографии в биологии презентация

Применение эксклюзионной хроматографии в биологии Студентка группы Б-42 Пигузова А.С.

Эксклюзионная хроматография Основана на распределении молекул, в соответствии с их размерами, между растворителем, заполняющим поры сорбента и протекающим между частицами сорбента. Неподвижная фаза – растворитель в порах сорбента. Подвижная фаза – вытекающий из колонки растворитель.

Виды проникающей хроматографии Гель-проникающая. Гель-фильтрационная. Гель – это сорбент, который готовится на основе природных или синтетических соединений, имеет поры определенного размера.

Применение в Биологии Используется для очистки высокомолекулярных биологических соединений. Так проводят очистку и разделение вирусов, белков, ферментов, гормонов, антител, нуклеиновых кислот и полисахаридов. Этим методом можно отделять аминокислоты от пептидов, фракционировать пептиды, образующиеся в результате гидролиза белков, а также олигонуклеотиды из гидролизатов нуклеиновых кислот.

Гель-фильтрация, или метод молекулярных сит Метод разделения белков с помощью гель-фильтрационной хроматографии основан на том, что вещества, отличающиеся молекулярной массой, по-разному распределяются между неподвижной и подвижной фазами. Хроматографическая колонка заполняется гранулами пористого вещества (сефадекс, агароза и др.). В структуре полисахарида образуются поперечные связи и формируются гранулы с "порами", через которые легко проходят вода и низкомолекулярные вещества. В зависимости от условий можно формировать гранулы с разной величиной "пор".

Гель-фильтрация, или метод молекулярных сит Неподвижная фаза - жидкость внутри гранул, в которую способны проникать низкомолекулярные вещества и белки с небольшой молекулярной массой. Смесь белков, нанесённую на хроматографическую колонку, вымывают (элюируют), пропуская через колонку растворитель. Вместе с фронтом растворителя движутся и самые крупные молекулы. Более мелкие молекулы диффундируют внутрь гранул сефадекса и на некоторое время попадают в неподвижную фазу, в результате чего их движение задерживается. Величина пор определяет размер молекул, способных проникать внутрь гранул. Так как гелевая структура сефадекса легко деформируется под давлением, гели стали заменять более жёсткими матрицами (сефактил, тойоперл), представляющими сферические гранулы с разными размерами пор. Выбор размеров пор в гранулах зависит от целей хроматографии.

Спасибо за внимание!